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配制過濾除 菌的細胞培養(yǎng)基過程
日期：2024-11-22 23:52
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摘要：
溫度與時間的設置： 基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40 ～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基因(長度為100～300bp時)可采用二溫度點法， 除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸(此溫度Taq DNA酶仍有較高的催化活性)。
1、變性溫度與時間：
變性溫度低，解鏈不wan全是導致PCR失敗的*主要原...
配制過濾除 菌的細胞培養(yǎng)基過程:
(1) 閱讀培養(yǎng)基使用說明，確定需要添加何種添加劑（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸鈉、HEPES等）。
(2) 根據(jù)所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）將袋內(nèi)殘留培養(yǎng)基洗下，并入容器。加注射用水至總體積的95％，輕微攪拌溶解。
(3) 加入規(guī)定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質(zhì)。
(4) 輕微攪拌溶解，加注射用水至規(guī)定體積。
(5) 用1 mol / L 氫氧化鈉溶液或 1 mol / L 鹽酸溶液調(diào)pH至所需值。
(6) 用0.22 μm濾膜正壓過濾除 菌。
(7) 溶液應在2℃－8℃下避光保存。
具體使用方法參照培養(yǎng)基包裝袋上的說明書。