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ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)溫育過(guò)程分析

日期:2024-11-22 10:42
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摘要: 在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后??乖贵w反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時(shí)刻,這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。 一、溫育時(shí)刻: ELISA屬固相免 疫測(cè)定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標(biāo)本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī),只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐漸平衡的進(jìn)程,因而需經(jīng)擴(kuò)散才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號(hào)抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此...
       在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反響,即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。抗原抗體反響的完結(jié)需求有必定的溫度和時(shí)刻,這一保溫進(jìn)程稱為溫育(incubation),有人稱之為孵育,在ELISA中似不恰當(dāng)。

一、溫育時(shí)刻:
ELISA屬固相免 疫測(cè)定,抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)作。以抗體包被的夾心法為例,參加板孔中的標(biāo)本,其間的抗原并不是都有平等的和固相抗結(jié)合的時(shí)機(jī),只需zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐漸平衡的進(jìn)程,因而需經(jīng)擴(kuò)散才干到達(dá)反響的結(jié)尾。在這以后參加的酶符號(hào)抗體與固相抗原的結(jié)合也相同如此。這就是為什么ELISA反響總是需求必定時(shí)刻的溫育。         

二、ELISA試劑盒溫育溫度:
溫育常選用的溫度有43℃、37℃、室溫文4℃(冰箱溫度)等。37℃是試驗(yàn)室中常用的保溫溫度,也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的適宜溫度。在樹(shù)立ELISA辦法作反響動(dòng)力學(xué)研討時(shí),試驗(yàn)標(biāo)明,兩次抗原抗體反響一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí),產(chǎn)物的生成可達(dá)頂峰。為加速反響,可進(jìn)步反響的溫度,有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行,但不宜選用更高的溫度??乖贵w反響4℃更為完全,在放射免 疫測(cè)定中多使反響在冰箱中過(guò)夜,以構(gòu)成zui多的沉積。但因所需時(shí)刻太長(zhǎng),在ELISA中一般不予選用。

三、溫育保溫:
保溫的方法除有的ELISA儀qi附有特制的電熱塊外,一般均選用水浴,可將ELISA板置于水浴箱中,ELISA板底應(yīng)貼著水面,使溫度敏捷平衡。為防止蒸騰,板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,此刻可讓反響板漂浮在水面上。若用保溫箱,ELISA板應(yīng)放在濕盒內(nèi),濕盒要選用傳熱性杰出的資料如金屬等,在盒底墊濕的紗布,zui終將ELISA板放在濕紗布上。濕盒應(yīng)先放在保溫箱中預(yù)溫至規(guī)則的溫度,特別是在氣溫較低的時(shí)分更應(yīng)如此。無(wú)論是水浴仍是濕盒溫育,反響板均不宜疊放,以確保各板的溫度都能敏捷平衡。室溫溫育的反響,操作時(shí)的室溫應(yīng)嚴(yán)厲約束在規(guī)則的范圍內(nèi),規(guī)范室溫溫度是指20-25℃,但具體操作時(shí)可根據(jù)說(shuō)明書(shū)的要求操控溫育。室溫溫育時(shí),ELISA板只需平置于操作臺(tái)上即可。
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