復蘇細胞收集處理

1、請按照說明書提前準備好基礎培養(yǎng)基、血清、因子、胰酶、雙抗，不要隨意更改培養(yǎng)條件，提前將生物安 全柜進行酒精消 毒和紫外滅 菌。

2、 收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液、培養(yǎng)基渾濁或污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。

3、 細胞在37℃培養(yǎng)箱中靜置2-3小時，在倒置顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，給細胞（100倍×2張，200倍×2張）以及培養(yǎng)瓶（外觀×1張）拍照留存，售后時肯定需要提供。

4、 瓶內(nèi)充液培養(yǎng)基（運輸培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，需按照說明書上的培養(yǎng)條件配制新鮮完全培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞。

5、鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，收集全部充液培養(yǎng)基，250g離心5分鐘，棄去培養(yǎng)瓶中充液培養(yǎng)基，用新鮮配制的完全培養(yǎng)基重懸未貼壁的細胞，將細胞鋪瓶至新的T25細胞培養(yǎng)瓶，補齊完全培養(yǎng)基至6mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，立刻對細胞進行傳代處理。

注：在快遞運送過程中細胞因振動會造成脫落現(xiàn)象，不論繼續(xù)培養(yǎng)還是傳代，未貼壁的細胞均需離心回收。

6、收到細胞后第1次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代 ，保種1支，另外1支傳代至T25新瓶，前3代建議均采用1:2傳代，若細胞明顯達到對數(shù)期，1:2傳代后第2天就長滿，則可提高傳代比例，采用1:3傳代，前面代次建議代代保種，以妨出現(xiàn)問題后無種可用。

7、 由于細胞在運輸過程中失去原有適宜的生長條件且長時間顛簸，收到細胞進行傳代后，建議前3-5代培養(yǎng)條件可適當提高血清含量以促進恢復細胞原有狀態(tài)并縮短到達對數(shù)期的時間。

8、 市面上血清魚龍混雜，假血清（BSA或替代物冒充血清）、劣質(zhì)血清（小牛冒充胎牛）、水貨（國產(chǎn)冒充進口）屢見不鮮，若客戶培養(yǎng)細胞過程中明顯感覺細胞生長速度不及預期，且無法更換血清，建議酌情提高血清含量來彌補 血清質(zhì)量的缺陷，以期提高細胞生長速度。

9、實驗結(jié)束后，將臺子內(nèi)的細胞放回培養(yǎng)箱，試劑放回冰箱，后噴灑Deeming實驗室安 全衛(wèi)士，預防微生物污染，關(guān)閉生物安 全柜，打開紫外滅 菌30分鐘以上。