操作步驟(僅供參考):
1.配制65mM H2O2基液:本試劑盒提供的H2O2基液中的H2O2濃度約為1M。由于過 氧化氫不是非常穩(wěn)定,使用前需自行測定過氧化氫的實際濃度。把濃度約為1M的H2O2基液用本試劑盒提供的CAT Assay buffer稀釋100倍,使H2O2基液中的H2O2濃度約為10mM。
2.準備樣品:
a,細胞或組織樣品:取恰當細胞或組織進行裂解,可以采用Leagene Western及IP 細胞裂解液,如果有必要需進行適當勻漿,低速離心取上清,-70℃凍存,用于CAT的檢測。
b,血漿、血清和尿液樣品:血漿、血清按照常規(guī)方法制備,用生理鹽水10倍稀釋后, 可以直接用于本試劑盒的測定,尿液通常也可以直接用于測定,-70℃凍存,用于CAT的檢測。
c,全血樣品:收集適量的全血(whole blood)至一抗凝管內,顛倒混勻。取100μl全 血凍融一次,用CAT Assay buffer1000倍后進行CAT檢測。
d,血液中的紅細胞裂解液:用抗凝管收集血液,顛倒混勻。取至少500μl全血4℃ 3000g離心5min,棄上清,沉淀用預冷的生理鹽水洗滌3次。
e,高活性樣品:如果樣品中含有較高活性的CAT,可以使用CAT Assay buffer稀釋。
f,(選做)樣品準備完畢后可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度,以便于后續(xù) 計算單位蛋白重量組織或細胞內的CAT含量。
3、 CAT檢測:按照下表設置空白管、自身對照管、測定管,溶液應按照順序依次加入,并 注意避免產生氣泡。如果樣品中的酶活性過高,可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定。樣品的檢測能設置平行孔。
4、分光光度計檢測405nm處吸光度,分光光度計比色杯光徑0.5cm。如果沒有分光光度計,亦可用酶標儀檢測,但如果有條件,盡量采用分光光度計檢測。蒸餾水調零,讀取各管吸光度值。一般應數(shù)小時內檢測完畢。
【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
產品名稱:乙酰膽堿酯酶(A-CHE)測試盒
規(guī)格:50管/24樣
測試方法:比色法
客戶自備儀器和試劑:
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
特點:
1、優(yōu)化設計的實驗方案,1小時即可完成
2、靈敏度高,操作便捷
3、試劑盒提供檢測果糖所需的全套試劑
常見樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測。
2、組織:按照組織質量(g) :提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g組織,
加入 1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
樣品制備:
1). 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,體積可達2.000ml。
2). 過濾混濁溶液。
3). 除去樣品中的CO 2 (果糖含量測試盒說明書過過濾)。
4 ). 果糖含量測試盒說明書過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調至8.0。
5 ). 調整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。
6 ). 用空白樣品做對照測定有色樣品(如有必要調整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經稀釋或體積更大的樣品。
8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質的樣品去蛋白。
10).含脂肪的樣品用熱水提取。
實驗通用規(guī)則:
1、洗液不夠時,可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。
2、液體全部加完后,可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒,混勻液體。也可以用酶標儀的晃動功能。
3、底物有一定的毒性,終止液對皮膚有腐蝕性,應盡量避免接觸。
4、檢測前,要打開酶標儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。
5、吸取液體時,要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
6、將液體加到酶標孔中時,避免槍頭和孔內液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會自然流下去。
7、溫浴時,要用不干膠或膠帶紙封好酶標板,防止水分的蒸發(fā)。
8、洗板時,每次洗液加入后,應靜置1分鐘,使清洗更加徹底。沒有洗板機時,倒去液體后,要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
9、用槍吸取液體時速度不能太快,以免產生氣泡而使吸取量不準確。
10、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
Alexa Fluor 350標記的羊抗小鼠IgMGoat Anti-Mouse IgM/Alexa Fluor 350 0.1ml
P2Y4受體抗體英文名稱:P2Y4 0.1ml
線粒體鐵轉運蛋白2抗體英文名稱:Mitoferrin 2 0.2ml
內脂素/內臟脂肪素/前B細胞克隆增強因子1抗體英文名稱:PBEF1 0.1ml
羊抗小鼠IgG抗血清Goat anti-Mouse IgG whole serum 1ml
PE-Cy7標記的鼠抗人IgG單克隆抗體Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-Cy7 0.1ml
E.coli O6大腸桿 體蛋白E.coli O6 (Escherichia coli O6) 0.5mg
甲狀腺球蛋白THY (thyroglobulin,TG) 10mg
人腫瘤壞死因子βTNF- Beta(Human Tumor necrosis factor Beta) ELISA KIT 96T
Toll樣受體2抗體英文名稱:TLR2 0.1ml
人蛋白聚糖PG(Human Proteoglycan) ELISA Kit 96T
人巨噬細胞炎性蛋白2Human macrophage inflammatory protein 2,MIP-2 ELISA Kit 96T
AGXT2L2蛋白抗體英文名稱:AGXT2L2 0.2ml 神經調節(jié)素1亞型HRGβ1(NRG1)ELISA試劑盒 NRG1 ELISA Kit
細胞角蛋白1抗體英文名稱:CK1 0.1ml 肌球蛋白重鏈(MHC)ELISA試劑盒 MHC ELISA Kit
半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗體英文名稱:Caspase-12 0.1ml 煙酸受體1(NIACR1)ELISA試劑盒 NIACR1 ELISA Kit
細胞周期相關激酶抗體英文名稱:CCRK 0.1ml 巖藻糖基轉移酶11(FUT11)ELISA試劑盒 FUT11 ELISA Kit
乙酰膽堿酯酶(A-CHE)測試盒五味子酯乙;Schizandrol B 58546-55-7 20mg 訂購|咨詢
五味子酚;Schisanhenol 69363-14-0 20mg 訂購|咨詢
衛(wèi)矛醇;Dulcitol 608-66-2 20mg 訂購|咨詢
1,2,3,4,6-O-五沒食子酰葡萄 14937-32-7 20mg 訂購|咨詢
偽原薯蕷皂苷;Pseudoprotodi 102115-79-7 20mg 訂購|咨詢
王不留行黃酮苷;Vaccarin 53452-16-7 20mg 訂購|咨詢
烏藥環(huán)戊烯二酮甲醚;Methyllind 3984-73-4 20mg 訂購|咨詢
烏藥環(huán)戊烯二酮;Linderone 1782-79-2 20mg 訂購|咨詢
無梗五加苷B;Eleutheroside 7374-79-0 20mg 訂購|咨詢
偽金絲桃素;Pseudohyperici 55954-61-5 10mg 訂購|咨詢