ELISA 試驗時,注意事項如下:
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。
產(chǎn)品名稱:大鼠延胡索酸酶ELISA檢測試劑盒
英文名稱:nicotinamide adenine dinucleotide
檢測范圍:0.25ng/mL~8ng/mL
靈敏度:0.1
產(chǎn)品貨號:BJ-R70129
產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T
產(chǎn)品保存:2-8℃,有效期6個月
主要組成成分:試劑
性狀:液體
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
96T指可以做94個標(biāo)本,2個標(biāo)準(zhǔn)對照
48T指可以做47個標(biāo)本,1個標(biāo)準(zhǔn)對照
96T-84個樣本
48T-42個樣本
待檢樣本:體液,血清,血漿,細胞培養(yǎng)上清液,尿液,組織勻漿,心房水標(biāo)本等等。
本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
樣品收集、處理及保存方法
1)血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)**的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
組成結(jié)構(gòu):
1、 血清:操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)**的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。
2、 血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
此IBL試劑盒能用于小鼠血清,EDTA血漿,細胞上清中白介素-6的定量檢測
試劑盒成分:
1 預(yù)包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T
2 酶標(biāo)記抗體: (30倍濃縮)HRP標(biāo)記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1
3 標(biāo)準(zhǔn)品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2
4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1
5 標(biāo)記抗體稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1
6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1
7 終止液: 1N硫酸 12mL x 1
8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標(biāo)儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標(biāo)紙(log/log) 吸水紙 試管(用于標(biāo)準(zhǔn)品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標(biāo)記抗體和顯色劑)
2,2'-二羥基二苯醚(>98.0%(GC)) 2,2'-Dihydroxydiphenyl Ether 15764-52-0 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 裂解液Ⅷ 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:細活性化蛋白制備
4-苯甲酰-4'-甲基二苯硫醚(>98.0%(GC)) 4-Benzoyl 4'-Methyldiphenyl Sulfide 83846-85-9 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 裂解液Ⅸ 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:真/酵母細胞裂解液
4-叔丁基二苯硫醚(>98.0%(GC)) 4-tert-Butyldiphenyl Sulfide 85609-03-6 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 裂解液Ⅸ 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:真/酵母細胞超強裂解液
雙(4-羥苯基)硫醚(>98.0%(GC)) Bis(4-hydroxyphenyl) Sulfide 2664-63-3 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 裂解液Ⅹ 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:真/酵母細胞活性化蛋白制備
5,5'-硫代雙水楊酸(>98.0%(GC)(T)) 5,5'-Thiodisalicylic Acid 1820-99-1 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T) 裂解液ⅩI 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:非變性細胞蛋白制備
4,4'-二氯二苯砜(>98.0%(GC)) 4,4'-Dichlorodiphenyl Sulfone 29411 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 10%AEBSF溶液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:完全保留細胞內(nèi)成分活性
雙[3,5-二溴-4-(2-羥乙氧基)苯基]砜(>96.0%(GC)) Bis[3,5-dibromo-4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone 53714-39-9 質(zhì)量規(guī)格:>96.0%(GC) RIPA基礎(chǔ)裂解液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格: 不含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑
雙[4-(2-羥乙氧基)苯基]砜(>97.0%(GC)) Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone 27205-03-4 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(GC) RIPA完全裂解液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:含有蛋白酶和磷酸酶抑制劑
二苯砜-3,3'-二磺酸二鈉鹽(>95.0%(T)) Diphenylsulfone-3,3'-disulfonic Acid Disodium Salt 39616-93-8 質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(T) 通用型非變性裂解液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:適合各種細胞native蛋白
3,3',4,4'-二苯基砜四羧酸二酸酐(>97.0%(HPLC)(T)) 3,3',4,4'-Diphenylsulfonetetracarboxylic Dianhydride 2540-99-0 質(zhì)量規(guī)格:>97.0%(HPLC)(T) 10X通用型非變性裂解液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:適合各種細胞native蛋白
二苯基砜-4,4'-二氯-3,3'-二磺酸二鈉(>98.0%(HPLC)(T)) Disodium Diphenylsulfone-4,4'-dichloro-3,3'-disulfonate 51698-33-0 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T) 無去垢劑裂解液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:用于物理裂解
雙酚 C(>98.0%(GC)) 2,2-Bis(4-hydroxy-3-methylphenyl)propane 79-97-0 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC) 動物樣品二維電泳裂解液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:用于動物/人體細胞或組織蛋白二維電泳
4,4'-異亞丙基二苯氧基乙酸(>98.0%(HPLC)(T)) 4,4'-Isopropylidenediphenoxyacetic Acid 3539-42-2 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)(T) 細樣品二維電泳裂解液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:用于細蛋白二維電泳
四溴雙酚A(>98.0%(GC)(T)) Tetrabromobisphenol A 79-94-7 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T) 酵母樣品二維電泳裂解液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:用于酵母蛋白二維電泳
大鼠延胡索酸酶ELISA檢測試劑盒小鼠 IL13Ra2 基因全長ORF克隆gremlin 骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 LCN2 / NGAL 基因全長ORF克隆GnRHR 促性腺釋放受體抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 MCSFR / CSF1R 基因全長ORF克隆GRP75 G蛋白偶聯(lián)受體75抗體規(guī)格: 0.2ml
小鼠 Integrinalpha11 基因全長ORF克隆GPA/GYPA/CD235a 血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 MEP1A 基因全長ORF克隆GPR78 G蛋白偶聯(lián)受體78抗體規(guī)格: 0.2ml
小鼠 sFRP-5 基因全長ORF克隆KiSS1R/GPR54 G蛋白偶聯(lián)受體54抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 IL34 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆GPR109A/HM74A G蛋白偶聯(lián)受體109A抗體規(guī)格: 0.2ml
小鼠 Integrinbeta1 基因全長ORF克隆G protein alpha S G蛋白αS抗體(鳥嘌呤核苷酸結(jié)合蛋白Gα s)規(guī)格: 0.2ml
小鼠 sFRP-4 基因全長ORF克隆GPX1 谷胱甘肽過氧化酶1規(guī)格: 0.2ml
小鼠 SCARB2 基因全長ORF克隆GRK1 G蛋白偶合受體激酶1抗體規(guī)格: 0.1ml
小鼠 LGMN / AEP 基因全長ORF克隆GPX3 谷胱甘肽過氧化酶3規(guī)格: 0.1ml
小鼠 LXN / Latexin 基因全長ORF克隆GPX4 谷胱甘肽過氧化酶4抗體規(guī)格: 0.2ml
小鼠 Integrinalpha4 基因全長ORF克隆GRK2/BARK1/ADRBK1 G蛋白偶合受體激酶2抗體規(guī)格: 0.1ml