操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
注:本公司提供試劑盒免費代測服務(wù)。需要其他檢測試劑盒請咨詢銷售人員。本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
產(chǎn)品名稱:大鼠胰島素受體底物1ELISA檢測試劑盒
英文名稱:insulin-degrading enzyme
檢測范圍:0.75ng/mL~24mIU/L
靈敏度:0.1
產(chǎn)品貨號:BJ-R70142
規(guī)格:48T/96T
主要成分:酶標板,試劑,標準品等。
試劑盒種屬:馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。
檢測目的:用于測定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標本..
組成:
48孔配制:
1.說明書: 1份
2. 封板膜: 2片(48)
3. 密封袋: 1個
4 酶標包被板: 1×48 (2-8℃保存)
5. 標準品: 0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標準品稀釋液: 1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10 .顯色劑B液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11 .終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存)
96孔配置:
1. 產(chǎn)品名稱說明書:1份
2. 封板膜:2片(96)
3. 密封袋: 1個
4. 酶標包被板:1×96 (2-8℃保存)
5. 標準品:0.5ml×1瓶(2-8℃保存)
6. 標準品稀釋液:1.5ml×1瓶(2-8℃保存)
7. 酶標試劑: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
8. 樣品稀釋液: 3 ml×1瓶(2-8℃保存)
9. 顯色劑A液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
10. 顯色劑B液:3 ml×1瓶(2-8℃保存)
11. 終止液:3ml×1瓶(2-8℃保存)
12. 濃縮洗滌液:(20ml×20倍)×1瓶(2-8℃保存
實驗步驟:
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次
10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%
乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書推薦方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫
度達到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×
2min,TBS 洗滌(2×2min)(具體修復(fù)方法見附 1)* 注:有些抗原勿需修復(fù),
直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育
30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37
℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
注意事項:
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間zui好控制在5分鐘內(nèi),如標本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4. 如標本中待測物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先將樣本稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)(×5×n)。
5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.本試劑不同批號組分不得混用。顯色劑B請避光保存。
7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準
腺苷 2':3'-環(huán)單磷酸鹽鈉鹽 Adenosine 2':3'-cyclic monophosphate sodium salt 37063-35-7 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 10 倍 TAE分子生物級濃縮緩沖溶液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:500毫升
P1,P5-Di(腺苷-5'-)五磷酸鹽,三鋰鹽 P1,P5-Di(adenosine-5’-)pentaphosphate, Trilithium Salt 75522-97-3 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 20 倍 SSPE分子生物級濃縮緩沖溶液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:500毫升
腺苷5‘-O-(-2-硫代三磷酸)三鋰鹽 Adenosine 5′-O-(2-Thiodiphosphate), Trilithium Salt 73536-95-5 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 10 倍 TPE分子生物級濃縮緩沖溶液 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:500毫升
2-甲基硫代二磷酸腺苷 2-Methylthio-ADP 3sodium salt 34983-48-7 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 異硫酸胍 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:1 公斤
腺苷-5'-三磷酸酯二鈉鹽 Adenosine 5'-triphosphate (ATP) disodium salt hydrate 51963-61-2 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 丙稀酰胺 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:1 公斤
腺苷 2′(3′)-單磷酸混合異構(gòu)體 Adenosine 2'(3')-monophosphate mixed isomers 130-49-4 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 BCA(2,2‘-聯(lián)喹林-4,4’二甲酸二納) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10克
腺苷5'-二磷酸核糖鈉 Adenosine 5'-diphosphoribose sodium salt 68414-18-6 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 乙基十六烷基二甲基溴化胺(cetyldimethylethammonium bromide) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:1公斤
8-疊氮-環(huán)二磷酸腺苷-核糖 8-Azido-cyclic adenosine diphosphate-ribose 150424-94-5 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 4-氨基-3-肼基-5巰基-1,2,4-三氮唑(AHMT) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10克
8-氨基腺嘌呤核苷 8-Amino Adenosine 3868-33-5 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 3-甲基-2-苯并噻唑腙鹽酸鹽(3-methyl-2-benzothiazolinone hydrazone;MBTH) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:10/20克
α-腺苷 α-Adenosine 5682-25-7 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 L-谷氨酰-α-萘酰胺(L-Glutamyl-α-naphthylamide) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:1克
腺苷 3’-單磷酸鈉鹽 Adenosine 3'-monophosphate sodium salt 4958-39-8 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 L-谷氨酰對硝基苯胺一水(L-Glutamyl-p-Nitroanilide monohydrate) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:1克
腺苷 3',5'-二磷酸鈉鹽 Adenosine 3',5'-diphosphate sodium salt 75431-54-8 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 谷胱甘肽(氧化型)(Glutathione;GSSH) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:1克
腺苷 2',5'-二磷酸鈉鹽 Adenosine 2',5'-diphosphate sodium salt 108347-94-0 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 二苯基甲酰胺(diphenylformamide) 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:25毫克
腺苷5'-O-硫一磷酸二鋰鹽 Adenosine 5'-O-thiomonophosphate dilithium salt 93839-85-1 質(zhì)量規(guī)格:美國進口 721型分光光度儀1毫升1厘米光徑玻璃比色皿 進口/國產(chǎn) 規(guī)格:1個
大鼠胰島素受體底物1ELISA檢測試劑盒甲型流感 H5N1 (A/goose/Guiyang/337/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)HER2/c-erbB2 HER2受體抗體規(guī)格: 0.1ml
甲型流感 H5N1 (A/Hong Kong/483/97) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)HER2 receptor HER2受體抗體規(guī)格: 0.1ml
甲型流感 H2N2 (A/Canada/720/2005) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)HER2 receptor(NT) HER2受體抗體規(guī)格: 0.1ml
甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)HER2 receptor(NT) HER2受體抗體(N端)規(guī)格: 0.1ml
甲型流感 H5N1 (A/chicken/Egypt/2253-1/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)Phospho-HER2(Tyr1221/1222) 磷酸化HER2受體抗體規(guī)格: 0.1ml
甲型流感 H1N3 (A/duck/NZL/160/1976) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)Phospho-HER2(Tyr1112) 磷酸化HER2受體抗體規(guī)格: 0.1ml
甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/1934) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)Phospho-HER2(Tyr1248) 磷酸化HER2受體抗體規(guī)格: 0.1ml
甲型流感 H1N1 (A/New Caledonia/20/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達載體)Phospho-HER2 (Tyr877) 磷酸化HER2受體抗體規(guī)格: 0.1ml