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產(chǎn)品詳情
  • 產(chǎn)品名稱:小鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞

  • 產(chǎn)品型號(hào):BJ-100323
  • 產(chǎn)品**:邦景
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簡(jiǎn)單介紹:
接收到小鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)小鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
詳情介紹:

原代細(xì)胞分離:

一、細(xì)胞培養(yǎng)

1取材 在無(wú)菌環(huán)境下從機(jī)體取出某種組織細(xì)胞(視實(shí)驗(yàn)?zāi)康亩ǎ?jīng)過(guò)一定的處理(如消化分散細(xì)胞、分離等)后接入培養(yǎng)器血中,這一過(guò)程稱為取材。如是細(xì)胞株的擴(kuò)大培養(yǎng)則無(wú)取材這一過(guò)程。機(jī)體取出的組織細(xì)胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。2培養(yǎng) 將取得的組織細(xì)胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過(guò)程稱為培養(yǎng)。3凍存及復(fù)蘇(可參閱后面有關(guān)章節(jié))為了保存細(xì)胞,特別是不易獲得的突變型細(xì)胞或細(xì)胞株,要將細(xì)胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度-196℃,將細(xì)胞收集至凍存管中加入含保護(hù)劑(一般為二甲亞砜或甘油)的培養(yǎng)基,以一定的冷卻速度凍存,保存于液氮中。在極低的溫度下,細(xì)胞保存的時(shí)間幾乎是無(wú)限的。復(fù)蘇一般采用快融方法,即從液氮中取出凍存管后,立即放入37℃水中,使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進(jìn)行培養(yǎng)。

二、原代細(xì)胞分離

凡是來(lái)源于胚胎、組織器官及外周血,經(jīng)特殊分離方法制備而來(lái)的原初培養(yǎng)的細(xì)胞稱之為原代細(xì)胞。1懸浮細(xì)胞的分離方法組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡(jiǎn)單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。2實(shí)體組織材料的分離方法對(duì)于實(shí)體組織材料,由于細(xì)胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細(xì)胞充分分散,形成細(xì)胞懸液,可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

三、細(xì)胞增殖檢測(cè)技術(shù)

目前主要有兩種用于檢測(cè)細(xì)胞增殖能力的方法。一種是直接的方法,通過(guò)直接測(cè)定進(jìn)行分裂

的細(xì)胞數(shù)來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力。另一種是間接的方法,即細(xì)胞活力(cell viability)檢測(cè)方法,通過(guò)檢測(cè)樣品中健康細(xì)胞的數(shù)目來(lái)評(píng)價(jià)細(xì)胞的增殖能力。顯然,細(xì)胞活力檢測(cè)法并不能終證明檢測(cè)樣品中的細(xì)胞是否在增殖。如細(xì)胞在某一培養(yǎng)條件下會(huì)自發(fā)啟動(dòng)凋亡程序,但的干擾可抑制凋亡的發(fā)生;這時(shí)若采用細(xì)胞活力檢測(cè)法,顯然可以區(qū)分兩種條件下的細(xì)胞數(shù)量,但我們并不能從干擾組細(xì)胞數(shù)大于對(duì)照組的事實(shí)說(shuō)明可促進(jìn)細(xì)胞增殖的結(jié)論。所以直接的證據(jù)應(yīng)該采用方法一。

其中常見檢測(cè):CCK8檢測(cè)法 ,MTT檢測(cè)法,Brdu檢測(cè)法,Edu檢測(cè)法,平板克隆形成。

四、細(xì)胞周期檢測(cè)技術(shù)

細(xì)胞周期指由細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次細(xì)胞分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過(guò)程,所需的時(shí)間叫細(xì)胞周期時(shí)間。

常用的方法:流式檢測(cè)細(xì)胞周期,標(biāo)記有絲分裂百分率法。

五、細(xì)胞凋亡檢測(cè)

常見檢測(cè)方法:流式檢測(cè)細(xì)胞凋亡,線粒體膜電位,活性氧檢測(cè),Hoechst染色,電鏡,TUNEL。

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產(chǎn)品名稱:小鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞

貨號(hào):BJ-100323

【培養(yǎng)指南】

對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞|細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。


【細(xì)胞凍存】

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行293/HEK-293細(xì)胞|細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO后進(jìn)行凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí),應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM條件下離心4分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO后進(jìn)行凍存。

【復(fù)蘇的原則】

快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,對(duì)細(xì)胞造成損害。復(fù)旦細(xì)胞庫(kù)各地均可發(fā)貨,統(tǒng)一價(jià)格,本公司出售的所有細(xì)胞僅供科研使用。

細(xì)胞培養(yǎng)方法:

1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細(xì)胞復(fù)蘇:

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。

3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)

②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;

③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;

④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。

2 ug pYADE4 pYADE4 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  SerpinC1 / AntithrombinIII / ATIII 抗體, 兔單抗 ELISA    50 μL

2 ug pYCP211 pYCP211 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  SerpinC1 / AntithrombinIII / ATIII 抗體, 兔多抗 ELISA    400 μL

2 ug pYCP50 pYCP50 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  CD171 / N-CAML1 / L1CAM 抗體, 兔單抗 ELISA    50 μg

2 ug pYCP50-poly pYCP50-poly 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  CD171 / N-CAML1 / L1CAM 抗體, 兔單抗 IHC-P   FCM   IF  ICC/IF    50 μg

2 ug pYCPlac111 pYCPlac111 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  IL-1 beta / IL1B 抗體, 鼠單抗 ELISA   IHC-P    50 μg

2 ug pYCPlac22 pYCPlac22 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  CHL-1 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 μg

2 ug pYD1 pYD1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  CD171 / N-CAML1 / L1CAM 抗體 (FITC), 兔單抗 FCM    25 Test

2 ug pYCPlac22-EGFP pYCPlac22-EGFP 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  IL-1 beta / IL1B / IL1F2 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 ELISA    50 μL

2 ug pYCPlac33 pYCPlac33 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  IL-1 beta / IL1B / IL1F2 抗體, 兔多抗 ELISA    400 μL

2 ug pYES2.0 pYES2.0 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  IL-1 beta / IL1B / IL1F2 抗體, 兔單抗 ELISA    50 μg

2 ug pYest2/ct pYest2/ct 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  D171 / N-CAML1 / L1CAM 抗體 (APC), 鼠單抗 FCM    25 Test

2 ug pYES2/CT/α-Factor pYES2/CT/α-Factor 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  CD171 / N-CAML1 / L1CAM 抗體, 鼠單抗 ELISA    50 μg

2 ug pYES2-EGFP pYES2-EGFP 低溫運(yùn)輸,-20℃保存  CD171 / N-CAML1 / L1CAM 抗體, 鼠單抗 FCM    50 μg

小鼠輸尿管平滑肌細(xì)胞葡萄完全培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

大巖筒(gloxinia)增殖培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

大丁草(gerbera)增殖培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

蕨類(fern)增殖培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

棗椰樹(date palm)培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

核桃誘導(dǎo)(DKW Juglans)培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

伽藍(lán)(kalanchoe)增殖培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

百合花(lily)增殖培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

杜鵑花(rhododendron)完全培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

火炬松(loblolly pine)培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

tobacco)完全培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

擬南芥(arabidopsis)完全培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

吊鐘海棠完全培養(yǎng)基 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格:500毫升溶液/片劑

 

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