細胞培養(yǎng)方法：

1、細胞傳代：細胞密度達到80-90%時即可傳代

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；

②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；

③1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；

④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；

⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；

⑥懸浮細胞直接離心收集，細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

2、細胞復(fù)蘇：

①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補加適量培養(yǎng)基。

3、細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

②1-2min后，顯微鏡下觀察細胞，大部分細胞回縮且有少量細胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；

③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細胞；

④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。

原代細胞分離：

訂購信息：

產(chǎn)品名稱：ARPE-19細胞

貨號：BJ-100351

【培養(yǎng)指南】

對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察Ⅱ型肺泡上皮細胞|細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

【細胞凍存】

待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行293/HEK-293細胞|細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。懸浮細胞凍存時，應(yīng)將細胞收集，1000RPM條件下離心4分鐘，少量保存上清液(防止細胞吸走)，加入部分新鮮培養(yǎng)基，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO后進行凍存。

【復(fù)蘇的原則】

快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害。復(fù)旦細胞庫各地均可發(fā)貨，統(tǒng)一價格，本公司出售的所有細胞僅供科研使用。

一、細胞培養(yǎng)

1取材 在無菌環(huán)境下從機體取出某種組織細胞（視實驗?zāi)康亩ǎ?，?jīng)過一定的處理（如消化分散細胞、分離等）后接入培養(yǎng)器血中，這一過程稱為取材。如是細胞株的擴大培養(yǎng)則無取材這一過程。機體取出的組織細胞的培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)。2培養(yǎng) 將取得的組織細胞接入培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板中的過程稱為培養(yǎng)。3凍存及復(fù)蘇（可參閱后面有關(guān)章節(jié)）為了保存細胞，特別是不易獲得的突變型細胞或細胞株，要將細胞凍存。凍存的溫度一般用液氮的溫度－196℃，將細胞收集至凍存管中加入含保護劑（一般為二甲亞砜或甘油）的培養(yǎng)基，以一定的冷卻速度凍存，保存于液氮中。在極低的溫度下，細胞保存的時間幾乎是無限的。復(fù)蘇一般采用快融方法，即從液氮中取出凍存管后，立即放入37℃水中，使之在一分鐘內(nèi)迅速融解。然后將細胞轉(zhuǎn)入培養(yǎng)器皿中進行培養(yǎng)。

二、原代細胞分離

凡是來源于胚胎、組織器官及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。1懸浮細胞的分離方法組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。2實體組織材料的分離方法對于實體組織材料，由于細胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細胞充分分散，形成細胞懸液，可采用機械分散法（物理裂解）和消化分離法。

三、細胞增殖檢測技術(shù)

目前主要有兩種用于檢測細胞增殖能力的方法。一種是直接的方法，通過直接測定進行分裂

的細胞數(shù)來評價細胞的增殖能力。另一種是間接的方法，即細胞活力（cell viability）檢測方法，通過檢測樣品中健康細胞的數(shù)目來評價細胞的增殖能力。顯然，細胞活力檢測法并不能終證明檢測樣品中的細胞是否在增殖。如細胞在某一培養(yǎng)條件下會自發(fā)啟動凋亡程序，但的干擾可抑制凋亡的發(fā)生；這時若采用細胞活力檢測法，顯然可以區(qū)分兩種條件下的細胞數(shù)量，但我們并不能從干擾組細胞數(shù)大于對照組的事實說明可促進細胞增殖的結(jié)論。所以直接的證據(jù)應(yīng)該采用方法一。

其中常見檢測：CCK8檢測法 ，MTT檢測法，Brdu檢測法，Edu檢測法，平板克隆形成。

四、細胞周期檢測技術(shù)

細胞周期指由細胞分裂結(jié)束到下一次細胞分裂結(jié)束所經(jīng)歷的過程，所需的時間叫細胞周期時間。

常用的方法：流式檢測細胞周期，標(biāo)記有絲分裂百分率法。

五、細胞凋亡檢測

常見檢測方法：流式檢測細胞凋亡，線粒體膜電位，活性氧檢測，Hoechst染色，電鏡，TUNEL。

125mL HEPES Lysis Buffer with Triton,2X HEPES Lysis Buffer with Triton,2X 常溫保存　　DZIP1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 μg

250mL HEPES Protein Extraction Buffer,5X HEPES Protein Extraction Buffer,5X 常溫保存　　chordin 抗體, 兔單抗 IHC-P    50 μg

250ml HEPES-Triton Protein Extraction Buffer  HEPES-Triton Protein Extraction Buffer  常溫保存　　Chordin 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 μg

100mL HEPPS Buffer,0.2M,pH7.0  HEPPS Buffer,0.2M,pH7.0  常溫保存　　ARID3B 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 μg

100mL HEPPS Buffer,0.2M,pH7.4  HEPPS Buffer,0.2M,pH7.4  常溫保存　　c-Met / HGFR 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 μg

100mL HEPPS Buffer,0.2M,pH8.0  HEPPS Buffer,0.2M,pH8.0  常溫保存　　Estrogen Receptor alpha 抗體, 兔單抗 WB    50 μg

100mL HEPPS Buffer,0.2M,pH8.5  HEPPS Buffer,0.2M,pH8.5  常溫保存　　Glypican 3 / GPC3 / OCI-5 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB   IP    50 μg

100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.0  HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.0  常溫保存　　ALPL 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 μg

100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.5  HEPPSO Buffer,0.2M,pH7.5  常溫保存　　STRA8 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 μg

100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH8.0  HEPPSO Buffer,0.2M,pH8.0  常溫保存　　Progesterone receptor / PGR 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P   IF  ICC/IF    50 μg

100mL HEPPSO Buffer,0.2M,pH8.5  HEPPSO Buffer,0.2M,pH8.5  常溫保存　　FNDC5 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 IHC-P    50 μg

250mL HPB 5X (High Phosphate Buffer)  HPB 5X (High Phosphate Buffer)  常溫保存　　UCP1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 μg

250mL Human RBC Lysis Buffer（人紅  裂解液）  Human RBC Lysis Buffer 常溫保存　　EGFR / HER1 / ErbB1 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB    50 μg

ARPE-19細胞乳制品L－乳酸比色法定量檢測試劑盒  進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

肉類L－乳酸比色法定量檢測試劑盒  進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

蛋類L－乳酸比色法定量檢測試劑盒  進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

L－乳酸待測樣品處理試劑盒 進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

酒類總?cè)樗岜壬ǘ繖z測試劑盒  進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

飲料總?cè)樗岜壬ǘ繖z測試劑盒  進口/國產(chǎn) 規(guī)格：20次

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