細(xì)胞傳代步驟： 
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

我司全程提供細(xì)胞生物體、生長(zhǎng)特性、來(lái)源、器官、類型、形態(tài)、培養(yǎng)條件、應(yīng)用、組織、凍存條件等復(fù)蘇及凍存細(xì)胞株說(shuō)明書信息，我們專業(yè)您的細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)，讓您實(shí)驗(yàn)再無(wú)煩擾！

產(chǎn)品名稱：細(xì)胞培養(yǎng)

貨號(hào)：BJ-205561

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明 :

1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 

2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃制造，并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理； 

3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕； 

4．如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過(guò)大，以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率； 

5．如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

培養(yǎng)操作:

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。天換液并 檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

使用方法：

收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過(guò)夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

2. 待細(xì)胞達(dá)到80%匯合時(shí)準(zhǔn)備進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

3. 細(xì)胞傳代

1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃溫浴3min左右；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入完全培養(yǎng)液終止消化；

3) 用吸管輕輕吹打混勻，按1:2或1:3等適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行接種傳代，然后補(bǔ)充新鮮的完全培養(yǎng)基至5mL，放入37℃，5% CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4) 待細(xì)胞完全貼壁后，培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的完全培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

動(dòng)物  /組織  色素C釋放凋亡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
植物  色素C釋放凋亡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
石蠟切片組織  色素C**組織化學(xué)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
  調(diào)亡DNA條帶檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
G-B  活力和凋亡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次
ATP生物發(fā)光法  繁殖與毒性定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次
R-G  活力和凋亡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：50次
ANNEXIN V－FITC標(biāo)記法  凋亡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
Phalloidin－FITC標(biāo)記法  凋亡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
核抗原－FITC標(biāo)記法  凋亡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10次
  凋亡誘導(dǎo)（DNA合成抑制）試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
  凋亡誘導(dǎo)（DNA損傷）試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
  凋亡誘導(dǎo)（DNA酶抑制）試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：20次
BrdU標(biāo)記法  繁殖流式  儀檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
BrdU標(biāo)記法  繁殖比色法定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次
BrdU標(biāo)記法  繁殖熒光定量檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/50 次
BrdU標(biāo)記法載玻片  繁殖熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次
BrdU標(biāo)記法組織冰凍切片  繁殖熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 規(guī)格：10/20次酒石酸長(zhǎng)春瑞賓/重酒石酸長(zhǎng)春瑞賓 Vinorelbine Tartrate 125317-39-7 質(zhì)量規(guī)格：>98%,USP,BR
重酒石酸長(zhǎng)春瑞賓(標(biāo)準(zhǔn)品) Vinorelbine Tartrate 125317-39-7 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
伏立康唑 Voriconazole 137234-62-9 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
伏立康唑（標(biāo)準(zhǔn)品） Voriconazole 137234-62-9 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
伏立諾他 Vorinostat/SAHA 149647-78-9 質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于  培養(yǎng) 
伏立諾他（標(biāo)準(zhǔn)品） Vorinostat/SAHA 149647-78-9 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
醋酸阿基瑞林 Argireline Acetate 616204-22-9  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
L-甲狀腺素甲狀腺素 Levothyroxine 51-48-9 質(zhì)量規(guī)格：>98,BR
腺嘌呤 Adenine 73-24-5 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
腺嘌呤（標(biāo)準(zhǔn)品） Adenine 73-24-5 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
琥乙紅霉素 Erythromycin ethylsuccinate 1264-62-6 質(zhì)量規(guī)格：potency>765 μg of erythromycin (C37H67NO13) per mg,USP35
細(xì)胞培養(yǎng)布洛芬 Ibuprofen 15687-27-1  質(zhì)量規(guī)格：>99%,BP/USP
布洛芬（標(biāo)準(zhǔn)品） Ibuprofen 15687-27-1  質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
馬來(lái)酸依那普利 Enalapril Maleate 76095-16-4 質(zhì)量規(guī)格：>98.5%,USP
馬來(lái)酸依那普利（標(biāo)準(zhǔn)品） Enalapril Maleate 76095-16-4 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
氟尿嘧啶,5-氟脲嘧啶,5-氟尿嘧啶 5-Fluorouracil 51-21-8 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR,可用于  培養(yǎng)
氟尿嘧啶,5-氟脲嘧啶,5-氟尿嘧啶（標(biāo)準(zhǔn)品） 5-Fluorouracil 51-21-8 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
琥珀酸舒馬曲普坦 Sumatriptan succinate  103628-48-4 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
琥珀酸舒馬曲普坦(標(biāo)準(zhǔn)品) Sumatriptan succinate  103628-48-4 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
硫酸鏈霉素 Streptomycin Sulphate 3810-74-0 質(zhì)量規(guī)格：>720IU/MG,BR
硫酸鏈霉素(標(biāo)準(zhǔn)品) Streptomycin Sulphate 3810-74-0 質(zhì)量規(guī)格：效價(jià)測(cè)定