微生物菌種的培養(yǎng)：

⒈ 孢子制備

⑴ 放線菌孢子的制備

一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中含有一些適合產(chǎn)孢子的營(yíng)養(yǎng)成分，如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無(wú)機(jī)鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1％，氮源不超過(guò)0.5％)，碳源豐富容易造成生理酸性的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，不利于放線菌孢子的形成，氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下，干燥和限制營(yíng)養(yǎng)可直接或間接誘導(dǎo)孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數(shù)為28 ℃，少數(shù)為37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為5～14天。

⑵ 霉菌孢子的制備

霉菌的孢子培養(yǎng)，一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農(nóng)產(chǎn)品為培養(yǎng)基。這是由于這些農(nóng)產(chǎn)品中的營(yíng)養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖，而且這類培養(yǎng)基的表面積較大，可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25～28 ℃，培養(yǎng)時(shí)間為4～14天。

⒉ 種子制備

⑴ 搖瓶種子制備

搖瓶種子進(jìn)罐，常采用母瓶、子瓶?jī)杉?jí)培養(yǎng)，有時(shí)母瓶種子也可以直接進(jìn)罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和完全，并易被菌體分解利用，氮源豐富有利于菌絲生長(zhǎng)。原則上各種營(yíng)養(yǎng)成分不宜過(guò)濃，子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高，更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。

⑵ 種子罐種子制備

種子罐種子制備的工藝過(guò)程，因菌種不同而異，一般可分為種子、二級(jí)種子和三級(jí)種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中，經(jīng)培養(yǎng)后形成大量的菌絲，這樣的種子稱為種子，把種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為二級(jí)發(fā)酵。如果將種子接入體積較大的種子罐內(nèi)，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)形成更多的菌絲，這樣制備的種子稱為二級(jí)種子，將二級(jí)種子轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐內(nèi)發(fā)酵，稱為三級(jí)發(fā)酵。同樣道理，使用三級(jí)種子的發(fā)酵，稱為四級(jí)發(fā)酵。

基本信息：

產(chǎn)品名稱：葉點(diǎn)霉培養(yǎng)

拉丁文: Phyllosticta│sp.

提供形式: 斜面培養(yǎng)物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: 14

生長(zhǎng)條件: 25℃

存儲(chǔ)條件: -80℃冰箱凍結(jié)法；定期移植法；其他

培養(yǎng)方法:

培養(yǎng)基 0012

生長(zhǎng)條件 28℃

存儲(chǔ)條件 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

培養(yǎng)及打管說(shuō)明：

1、安瓿瓶開封：用浸過(guò)75％酒精的脫脂棉擦凈安瓿管，用火焰加熱其頂端，滴少量無(wú)菌水至加熱頂端使之破裂，用銼刀或者鑷子敲下已破裂的安瓿管頂端。

2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)：用無(wú)菌吸管吸取0.3--0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基，滴入安瓿管內(nèi)，輕輕振蕩，使凍干菌體溶解呈懸浮狀。吸取全部菌體懸浮液，移植于1-2支建議的培養(yǎng)基試管中，并在建議的條件下培養(yǎng)。

3、注意事項(xiàng)：菌種活化前，請(qǐng)將安瓿管保存在6-10℃的環(huán)境下，某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后，延遲期較長(zhǎng)，需要連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng)

4、復(fù)蘇后的菌種在傳1-2代后使用。

5、暫不啟開的安瓿及復(fù)蘇后需保藏的斜面應(yīng)于4℃中保藏。

保藏方法：

1. 傳代培養(yǎng)保藏法

又有斜面培養(yǎng)、穿刺培養(yǎng)、皰肉培養(yǎng)基培養(yǎng)等（后者作保藏厭氧**用），培養(yǎng)后于4-6℃冰箱內(nèi)保存。

2. 液體石蠟覆蓋保藏法

是傳代培養(yǎng)的變相方法，能夠適當(dāng)延長(zhǎng)保藏時(shí)間，它是在斜面培養(yǎng)物和穿刺培養(yǎng)物上面覆蓋的液體石蠟，一方面可防止因培養(yǎng)基水分蒸發(fā)而引起菌種死亡，另一方面可阻止氧氣進(jìn)入，以減弱代謝作用。

3. 載體保藏法

是將微生物吸附在適當(dāng)?shù)妮d體，如土壤、沙子、硅膠、濾紙上，而后進(jìn)行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和濾紙保藏法應(yīng)用相當(dāng)廣泛。

4. 寄主保藏法

用于目前尚不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物，如病毒、立克次氏體、螺旋體等，它們必須在生活的動(dòng)物、昆蟲、雞胚內(nèi)感染并傳代，此法相當(dāng)于一般微生物的傳代培養(yǎng)保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法與冷凍干燥保藏法進(jìn)行保藏。

5. 冷凍保藏法

可分低溫冰箱（-20-30℃，-50-80℃）、干冰酒精快速凍結(jié)（約-70℃）和液氮（-196℃）等保藏法。

6. 冷凍干燥保藏法

先使微生物在極低溫度（-70℃左右）下快速冷凍，然后在減壓下利用升華現(xiàn)象除去水分（真空干燥）。有些方法如濾紙保藏法、液氮保藏法和冷凍干燥保藏法等均需使用保護(hù)劑來(lái)制備細(xì)胞懸液，以防止因冷凍或水分不斷升華對(duì)細(xì)胞的損害。

改良rv培養(yǎng)基 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)  Rv 250

5號(hào)膽鹽 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 25克 Bile salt No. 5 BR，70%

需氣厭氣培養(yǎng)基 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 Thioglycollate Medium 用于培養(yǎng)需氧、微需氧和厭氧

SPS瓊脂 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 SPS Agar 產(chǎn)氣莢膜梭的平板計(jì)數(shù)

哥倫比亞瓊脂培養(yǎng)基 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 Columbia Agar Medium 營(yíng)養(yǎng)要求較高的細(xì)的培養(yǎng)基及溶血試驗(yàn)，梭的檢測(cè)

葡萄糖肉浸液肉湯 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 Dextrose Meat Infusion Broth 用于溶血性鏈球的增培養(yǎng)

42℃生長(zhǎng)培養(yǎng)基 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 42℃ Growth Medium 副溶血弧42℃生長(zhǎng)試驗(yàn)

超級(jí)肉湯 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 250克 Super Broth BR

鼠李糖發(fā)酵管 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) 20支 鼠李糖發(fā)酵管 BR

葉點(diǎn)霉培養(yǎng)Rabbit Anti-dog IgG/APC  APC標(biāo)記的兔抗狗IgG 0.1ml

PFKFB2  果糖-2,6-二磷酸酶心肌酶抗體 0.2ml

c-Maf  原癌基因cMAF抗體 0.1ml

phospho-Tau protein(Ser404)  磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 0.1ml

JNK2  氨基末端激酶2抗體 0.2ml

Goat Anti-human IgG/APC  APC標(biāo)記的羊抗人IgG 0.1ml

Rabbit Anti-MK IgM/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的兔抗猴IgM 0.1ml

Parvalbumin  細(xì)小清蛋白抗體 0.2ml

NR1/NMDAR1  谷氨酸受體1抗體 0.1ml

Hes5  發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子-5抗體 0.2ml

Galectin 7  半乳糖凝集素7抗體 0.2ml

MAVS  線粒體抗信號(hào)MAVS蛋白抗體 0.2ml

Rabbit Anti-Biotin/Bio  生物素標(biāo)記的兔抗生物素抗體IgG 0.1ml