使用方法:
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
訂購信息：
產(chǎn)品名稱：戈氏放線菌熒光-PCR法
英文名稱：Actinomyces gerencseriaePCR
貨號：BJ-01R3227
產(chǎn)品規(guī)格：50T
運輸：低溫
保存：負20度
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨
【儲存條件及有效期】:
-20℃避光保存，避免反復凍融，有效期6個月。
【適用儀器】:
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運輸】：
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應避免反復凍融（多凍融3次）；
u 運輸：采用**或泡沫箱加冰密封進行運輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】:
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括量和相對定量）和定性分析。
主要服務：DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
PCR反應的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應中模板與引物的結(jié)合(復性)可以在較高的溫度下進行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位)；在學中zui小檢出率為3個。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應液加好后，即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應，一般在2～4 小時完成擴增反應。擴增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細胞、活PCR技術概論。
(Ac)Phe-Lys(Alloc)-PABC-PNP 25mg NCC007 500mg NADP+ 5mg
Rotigotine D7 Hydrochloride 0.1mg SRR Human 1g Oxtriphylline 5mg
M CSF Rat HEK 250mg Diphenylphosphine isopropyl ester 500μg Carboxyatractyloside (potassium salt) 250mg
PVR Human 10mg Rp-8-bromo-Cyclic AMPS (sodium salt) 5g PCI-24781 (CRA-024781) 5mg
sRANK Receptor Human 100g (R)-(-)-α-Methylhistamine dihydrobromide 25mg Phthaloyl-Leu-OH 2μg
PDE-9 inhibitor 10mg BIBU 1361 dihydrochloride 25mg WHI-P97 10mg
WWL 70 10μg REV 5901 1mg E3 Ligase Ligand-Linker Conjugates 25 Trifluoroacetate 1mg
H-Gln-Glu-OH 5mg Cdc25A (80-93) (human) 20μg 25G-NBOMe (hydrochloride) 10mg
Pyr-Pro-Val-pNA 100mg l-Atabrine dihydrochloride 50mg tarloxotinib bromide (TH-4000) 1mg
p-Hydroxycinnamic acid (NSC 59260) 1mg Org 25543 hydrochloride 5mg CCT245737 5g
Arachidonic Acid (sodium salt) 5g Metofenazate (Methophenazine) 1g Fumiquinazoline D 10mM*1mLinDMSO
LY-411575 100mg Quetiapine sulfoxide 1mg Anthranilyl-HIV Protease Substrate 10mg
Luteoloside 1mg N-Oleoyl glycine 5mg Kainic acid 1mg
N-acetyl Leukotriene E4 50mg H3B-120 5mg GJ-103 (sodium salt) 20μg
VSV-G Peptide 1mg Sivelestat sodium tetrahydrate 5mg WYE-687 5mg
戈氏放線菌熒光-PCR法表沒食子兒茶素沒食子酸酯 英文名稱EGCG 含量：HPLC≥99% 20mg/支 ACADM/MCAD ?；o酶A脫氫酶中鏈抗體 0.2ml
表兒茶素沒食子酸酯 英文名稱ECG 含量：HPCL≥98% 20mg/支 ACADL ?；o酶A脫氫酶長鏈抗體 0.1ml
表沒食子兒茶素(EGC) 英文名稱Epigallocatechin 含量：98%,99% 20mg/支 ACADVL ?；o酶A脫氫酶很長鏈抗體 0.2ml
沒食子兒茶素沒食子酸酯(GCG) 英文名稱Gallocatechin gallate 含量：98%,99% 20mg/支 ACAT1 膽固醇?；D(zhuǎn)移酶1抗體 0.2ml
銀杏內(nèi)酯A 英文名稱GinkgolideA 含量：HPLC≥98% 20mg/支 SOAT2/ACAT2 膽固醇酰基轉(zhuǎn)移酶2抗體 0.2ml
銀杏內(nèi)酯B 英文名稱GinkgolideB 含量：HPLC≥98% 20mg/支 Aconitase 2/ACO2 鐵調(diào)節(jié)蛋白2抗體 0.2ml
銀杏內(nèi)酯C 英文名稱GinkgolideC 含量：HPLC≥98% 20mg/支 ACOX1 過氧化物酶?；o酶A氧化酶1抗體 0.2ml
白果內(nèi)酯 英文名稱Bilobalide 含量：HPLC≥98% 20mg/支 ACOX2 過氧化物酶?；o酶A氧化酶2抗體 0.2ml
斑蝥素 英文名稱Cantharidin 含量：HPLC≥98% 20mg/支 ADCY1 腺苷酸環(huán)化酶1抗體 0.2ml