PCR反應(yīng)的特異性決定因素為
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；產(chǎn)品僅用于科研使用
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱：基孔肯雅病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：BJ-01R5019
產(chǎn)品規(guī)格：50T
運(yùn)輸：低溫
保存：負(fù)20度
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨

【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個(gè)月。
【適用儀器】
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運(yùn)輸】：
u 樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
u 運(yùn)輸：采用或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
使用方法
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
T2細(xì)胞，轉(zhuǎn)HLA-2基因B細(xì)胞 小鼠癌細(xì)胞,MA891細(xì)胞 人神經(jīng)元cDNAHN cDNA-d4質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Isoniazid-d4

NCI-H596(人肺腺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2噻托溴銨-d3質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Tiotropium-d3 Bromide

CNE(人鼻咽癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0134KU812(人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 雜交瘤(B類);Z1510A2G6A2C7去乙基鹽酸胺酮-d4質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Desethyl Amiodarone-d4

中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(亞系克隆);CHO-HCV-E2去乙基鹽酸胺酮質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Desethyl Amiodarone

ERN1 Others Human 人 ERN1 / IRE1 (aa 465-977) 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 特非那定質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRTerfenadine
Calu-6(人肺退行性癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人前列腺微血管內(nèi)皮細(xì)胞HPrMEC鄰磺酰酞鈉鹽，英文名或英文縮寫(xiě)：Cresol Red wo7ium salt，級(jí)別：生物技術(shù)級(jí)，98%，規(guī)格：250毫克

人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞cDNAHBMEC cDNAS-Alpine-硼完 B-ISOPINOCcMPHqYL-9-BORcBICYCLO[3.3.1]NONcNq 4371-63-1

IL23 Others Human 人 IL-23A & IL-12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) OED60K型發(fā)酵工業(yè)通用消泡劑，英文名或英文縮寫(xiě)：Antifoam OED60K，級(jí)別：超，98%，規(guī)格：1克

B95-8 絨猴EBV轉(zhuǎn)化的白細(xì)胞3,4-乙撐二氧，英文名或英文縮寫(xiě)：EDOT，級(jí)別：2N，99%，規(guī)格：10克

CL-0190RAW 264.7(小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞)5×106cells/瓶×2OPD 5g/10g/50g/250g原裝 Amresco 0688
基孔肯雅病毒熒光PCR檢測(cè)試劑盒SK-NEP-1(人腎母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2糖化酶10克RT

Hela(人細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0426RKO-E6(人結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 人胚肺成纖維細(xì)胞;MRC-5雙酚芴 9,9-Bis(4-xy7noxyphqnyl)fluorqnq 336-71-3

TNFa轉(zhuǎn)染耐VP16絨癌細(xì)胞;JEG-3-VP16-TNFaMEGA-9MEGA-9超級(jí)5G85261-19-4RT

CD79B Others Mouse 小鼠 CD79B / B29 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 100bpDNALadderⅡ100克

MKN-45 低分化胃癌(-N，N-雙(2-乙磺酸))

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。