PCR反應(yīng)的特異性決定因素為
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；產(chǎn)品僅用于科研使用
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的**量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
訂購(gòu)信息
產(chǎn)品名稱(chēng)：卡氏肺孢子蟲(chóng)熒光PCR檢測(cè)試劑盒
貨號(hào)：BJ-01R5023
產(chǎn)品規(guī)格：50T
運(yùn)輸：低溫
保存：負(fù)20度
有效期：一年
貨期：現(xiàn)貨

【儲(chǔ)存條件及有效期】
-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融，有效期6個(gè)月。
【適用儀器】
ABI7300、ABI7500、LightCycler 480、iCycleriQ5、CFX96、SLAN等熒光定量PCR儀。
【樣本采集、存放及運(yùn)輸】：
u 樣本采集：各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集；
u 存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（多凍融3次）；
u 運(yùn)輸：采用或泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
本公司產(chǎn)品僅用于科研。
【自備試劑】
核酸提取試劑，如QIAGEN QIAamp Viral RNA Mini試劑盒，也可選擇其他合適的核酸提取產(chǎn)品。
組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
使用方法
一、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
2、或柱式病毒 RNAout。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
1. 按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 μL 體系）
2. 70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴。
3. 嚴(yán)格按順序加入 6μL RT Buffer（含 dNTP）和 2μL MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶（含 RI），
反應(yīng)終體積為 20μL。
4. 42℃保溫 60 分鐘。此步為 RT 反應(yīng)。
5. 70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng)，然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作為 PCR 模板使用，丌需要純化。
CL-0467WPMY-1(人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞)5×106cells/瓶×2十八烷(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)Octadecane

CXCL16 Others Rat 大鼠 CXCL16 / SR-PSOX 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 2-辛酮(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥99.5%(GC)2-Octanone

大鼠虹膜色素上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL蓓薩羅丁(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：>99%Bexarotene

U-373MG人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞 U-373MG glioma cells DMEM+10% FBS酮洛芬質(zhì)量規(guī)格：>99%,ARKetoprofen

IL1B Protein Rabbit 重組兔 IL-1 beta / IL1B 蛋白酮洛芬(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Ketoprofen
CDH15 Others Rat 大鼠 Cadherin-15 / CDH15 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) N-氧基帕潘立酮質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Paliperidone N-Oxide

大鼠肝星形細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL帕潘立酮-d4質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Paliperidone-d4

6T-CEM人T細(xì)胞白血病細(xì)胞 The 6T-CEM of human T cell leukemia cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS乳酸環(huán)丙沙星質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Ciprofloxacin lactate

FGFBP3 Protein Human 重組人 FGFBP3 蛋白 (His 標(biāo)簽)甲酰環(huán)丙沙星質(zhì)量規(guī)格：美國(guó)進(jìn)口Formyl Ciprofloxacin

Beta-TC-6(小鼠胰島素瘤胰島β細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人成纖維細(xì)胞HLF6'-(二乙氨基)-1',2'-苯并熒烷(>98.0%(GC)(T))質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)6'-(Diethylamino)-1',2'-benzofluoran
卡氏肺孢子蟲(chóng)熒光PCR檢測(cè)試劑盒CD36 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD36 / SCARB3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) PAGEPLUSCONCENTRATEPage Plus,40%濃縮液生物技術(shù)級(jí)500MLRT

人成纖維細(xì)胞-新生兒總RNAHDF-n NA2-拂-4-肖基本酚 2-Fluoro-4-nitnophqnol 403-19-0

MDA-MB-435細(xì)胞，人癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞 鼠癌細(xì)胞系,MA-782細(xì)胞 原代滑膜皮細(xì)胞特制基礎(chǔ)無(wú)血清培養(yǎng)基Many types of cells包裝：500/100mlLTGRSFYELLOWISHCERTIFIED亮綠生物染料級(jí)100G5141-20-8RT

PATU8988(人胰腺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-蘇酸25克

HDLEC  Pellet 人類(lèi)皮膚管內(nèi)皮細(xì)胞團(tuán)塊(成年捐獻(xiàn)者) > 1 mio.cells 角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)添加物(不含BPE)KGS-292-43-31-本基-3-吡唑烷酮pxenidone

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。