一抗操作步驟:
一抗的操作步驟主要包括封閉、?一抗孵育和洗滌。?
封閉:?這一步驟的目的是為了防止非特異性的蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)與抗體結(jié)合,?從而引起非特異的染色和背景。?通常使用惰性蛋白質(zhì)或非離子去污劑來(lái)封閉膜上的未結(jié)合位點(diǎn),?以降低抗體的非特異性結(jié)合。?常用的封閉試劑有5%的BSA或脫脂奶粉,?緩沖液一般選擇PBST或TBST。?封閉條件通常為室溫或37℃緩慢搖動(dòng)1~2小時(shí),?特殊情況也可4℃過(guò)夜。?封閉完成后需要進(jìn)行洗膜,?以去除膜上未結(jié)合的封閉試劑。?
一抗孵育:?在一抗孵育之前,?需要參考一抗的說(shuō)明書,?按照適當(dāng)比例用封閉液稀釋一抗。?吸盡封閉液后,?立即加入稀釋好的一抗,?室溫或4℃在搖床上緩慢搖動(dòng)孵育1~2小時(shí)。?如果一抗孵育一小時(shí)效果不佳,?可以在4℃緩慢搖動(dòng)孵育過(guò)夜。?然后回收一抗,?加入Western洗滌液,?在搖床上緩慢搖動(dòng)洗滌5-10分鐘,?共洗滌3次。?如果結(jié)果背景較高,?可以適當(dāng)延長(zhǎng)洗滌時(shí)間并增加洗滌次數(shù)。?
洗滌:?洗滌的目的是為了洗去一抗的非特異性結(jié)合,?洗滌的效果直接影響結(jié)果背景的深淺。?建議使用PBST或TBST作為洗滌液,?其中的Tween20有助于去除非特異性的結(jié)合,?減少背景。?洗滌的次數(shù)和時(shí)間根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)確定,?建議清洗3-5次,?每次5分鐘。
貨號(hào) |
規(guī)格 |
價(jià)格 |
用途 |
BJ014677 |
50ul |
1380 |
僅供科研實(shí)驗(yàn) |
BJ014677 |
100ul |
2380 |
僅供科研實(shí)驗(yàn) |
BJ014677 |
200ul |
3480 |
僅供科研實(shí)驗(yàn) |
商品屬性:
英文名稱:SERPIN A11
中文名稱:絲氨酸蛋白酶抑制劑A11抗體
別 名;Antiproteinase like 2; Serine (or cysteine)
proteinase inhibitor clade A (alpha 1 antiproteinase antitrypsin) member 11 ;
Serpin A11; Serpin peptidase inhibitor clade A (alpha 1 antiproteinase
antitrypsin) member 11; Serpina11; Serpina 11; Serpin-a11; SPA11_MOUSE.
研究領(lǐng)域;細(xì)胞生物
抗體來(lái)源;Rabbit
克隆類型;Polyclonal
交叉反應(yīng); Rat, (predicted: Mouse, )
產(chǎn)品應(yīng)用;ELISA=1:5000-10000
IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 ICC=1:100-500 IF=1:100-500 (石蠟切片需做抗原修復(fù))
not yet tested in
other applications.
optimal
dilutions/concentrations should be determined by the end user.
理論分子量;45kDa
細(xì)胞定位;分泌型蛋白
性 狀;Liquid
濃 度;1mg/ml
免 疫 原;KLH conjugated synthetic
peptide derived from mouse SERPIN A11: 181-180/427
亞 型;IgG
純化方法;affinity purified by Protein A
保存條件;Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid
repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng);This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
抗體注意事項(xiàng):
確定抗體的名字和特性:?注意抗體的中英文名字、?它名、?亞型等信息,?這些信息對(duì)于選擇正確的抗體至關(guān)重要。?
明確實(shí)驗(yàn)類型:?了解你的實(shí)驗(yàn)類型(?如ELISA、?WB、?IHC、?ICC或FACS)?,?因?yàn)榭贵w的說(shuō)明書通常會(huì)列出該抗體經(jīng)驗(yàn)證過(guò)的實(shí)驗(yàn)類型。?如果說(shuō)明書沒(méi)有提及某種應(yīng)用類型,?并不意味著該抗體不適用于該實(shí)驗(yàn),?只是表示尚未經(jīng)過(guò)該實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。?
選擇適當(dāng)?shù)膶?shí)驗(yàn)樣本種屬:?確定你的實(shí)驗(yàn)樣本是來(lái)自人類、?小鼠還是大鼠等,?因?yàn)榭贵w的說(shuō)明書會(huì)列出該抗體經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證過(guò)的物種。?
考慮樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì):?了解樣本蛋白的結(jié)構(gòu)性質(zhì)有助于選擇的抗體,?特別是當(dāng)樣本蛋白在提取和處理過(guò)程中可能會(huì)變性時(shí),?這會(huì)影響抗體的親和反應(yīng)。?
單多克隆抗體的選擇:?單克隆抗體特異性強(qiáng)但親和力相對(duì)小,?而多克隆抗體特異性稍弱但親和力強(qiáng)。?根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適的抗體。?
注意抗體的特異性:?原的類型對(duì)抗體對(duì)靶蛋白的特異性有顯著影響。?應(yīng)選擇針對(duì)已充分表征的原產(chǎn)生的抗體,?避免使用不合適或質(zhì)量差的原產(chǎn)生的抗體。?
封閉液的選擇:?封閉液的選擇應(yīng)根據(jù)抗體說(shuō)明書進(jìn)行,?常用的封閉液包括脫脂奶粉和BSA。?封閉液的目的是封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn),?降低背景噪音3。?
抗體孵育注意事項(xiàng):?使用干凈的孵育盒子,?避免油脂等雜物沾到膜上造成非特異信號(hào)。?如果一次性需要檢測(cè)多個(gè)蛋白,?可以考慮將膜剪開(kāi)或采用其他技術(shù)如抗體洗脫液處理后再次使用膜
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